IFI-44 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-405329-ACT

ヒトIFi44（interferon-induced protein 44；IFI-44）は、I型およびIII型インターフェロンシグナル伝達の下流で誘導されるインターフェロン刺激遺伝子（ISG）であり、RIG-I様受容体やcGAS–STINGなどのパターン認識受容体（PRR）経路からの入力を統合します。IFI-44の発現は、JAK–STATによって駆動される抗ウイルス性の転写プログラムおよびより広範な自然免疫活性化の指標として一般的に用いられます。IFI44レベルの制御異常は、炎症性・自己免疫性の病態や感染に伴う転写シグネチャーなど、さまざまな文脈で報告されており、疾患に関連するインターフェロン生物学との関与が示唆されています。研究用途では、IFI44はインターフェロン応答の強度、自然免疫ネットワークの結合性、ストレス応答性遺伝子の制御を解析するための分子指標として活用されます。

IFI-44 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性IFI44の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

IFI-44 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における IFI44 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はIFI44転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性IFI-44の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のIFI44遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるIFI-44依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびIFI44発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるIFI-44経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。