IEX-1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403107-ACT

O IER3 humano codifica a proteína de resposta imediata IEX-1, um regulador induzível por estresse que integra a sinalização inflamatória e de fatores de crescimento às decisões de sobrevivência celular. A IEX-1 modula a apoptose e a proliferação por meio de vias que incluem NF-κB, MAPK/ERK e respostas associadas ao p53, e tem sido relacionada à homeostase mitocondrial e ao controle de espécies reativas de oxigênio. Alterações na expressão de IER3/IEX-1 foram relatadas em contextos de inflamação crônica, remodelamento vascular e múltiplos cânceres, nos quais pode influenciar a adaptação ao estresse e programas transcricionais ligados à imunidade. Essas propriedades tornam o IER3 um ponto útil para estudar a regulação gênica responsiva a estímulos, a sinalização de estresse oxidativo e desfechos de destino celular dependentes do contexto.

IEX-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de IER3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

IEX-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus IER3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição IER3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de IEX-1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus IER3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de IEX-1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via IEX-1 em células tumorais com expressão de IER3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.