HYPB CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-402789

概要

SETD2（別名HYPB）は、転写が活発に行われている遺伝子本体領域全体にわたり、ヒストンH3のリジン36のトリメチル化（H3K36me3）を担う主要なヒストンメチル基転移酵素をコードしています。この修飾は、転写伸長を共転写的RNAプロセシング、クロマチン構造の制御、DNA修復機構のリクルートと協調させることで、SETD2の活性をゲノム安定性の維持に結び付けています。SETD2依存的なH3K36me3は、相同組換えにおける修復経路選択の決定にも寄与し、複製フォークの動態を適切に保つ役割も担います。SETD2機能の変化やH3K36メチル化パターンの破綻は、がんにおけるエピジェネティックな制御異常、転写ストレス、DNA損傷応答の欠陥と関連して、しばしば研究対象となっています。

HYPB CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるSETD2遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、SETD2内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、SETD2のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、HYPBタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、HYPBシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、SETD2欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• HYPBの機能に不可欠なSETD2エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、SETD2ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• HYPB CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびHYPB CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、SETD2遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  HYPB HDRプラスミド（h）および HYPB HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはSETD2ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のSETD2標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。