HuR/ELAV1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-421003-ACT

Elavl1 codifica HuR/ELAV1, uma proteína ligante de RNA que reconhece elementos ricos em AU nas regiões 3′ UTR e modula a estabilidade, a localização e a tradução de mRNAs. Em células de camundongo, a HuR coordena programas de regulação gênica pós-transcricional ligados ao controle do ciclo celular, respostas ao estresse, sinalização imune inata e diferenciação, ao moldar a meia-vida de transcritos de citocinas, fatores de crescimento e genes associados à sobrevivência. A atividade de HuR é regulada dinamicamente por fosforilação e pelo trânsito núcleo-citoplasmático, integrando entradas de sinalização de MAPK, PKC e outras vias para ajustar finamente os resultados de expressão gênica. Regulons de RNA dependentes de HuR desregulados têm sido associados na literatura à inflamação, transformação oncogênica e remodelamento tecidual, tornando Elavl1 um nó útil para estudos mecanísticos de metabolismo de RNA e crosstalk entre vias de sinalização.

HuR/ELAV1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Elavl1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

HuR/ELAV1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Elavl1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Elavl1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de HuR/ELAV1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Elavl1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de HuR/ELAV1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via HuR/ELAV1 em células tumorais com expressão de Elavl1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.