HuR/ELAV1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400141-ACT

ELAVL1 (HuR) é uma proteína ligante de RNA expressa de forma ubíqua que reconhece elementos ricos em AU nas UTRs 3′ para estabilizar mRNAs-alvo e modular a tradução. Ao coordenar a regulação pós-transcricional da expressão génica, a HuR influencia a progressão do ciclo celular, a dinâmica dos grânulos de stress, as respostas a danos no ADN e a sinalização inflamatória, incluindo programas ligados a NF-κB e MAPK. A translocação (shuttling) da HuR entre o núcleo e o citoplasma integra sinais de stress oxidativo e de citocinas para remodelar a saída do transcriptoma. A atividade desregulada de ELAVL1 tem sido associada a um controlo alterado da apoptose, da senescência e de redes de expressão génica pró-oncogénicas em múltiplos contextos celulares relevantes para doenças.

HuR/ELAV1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ELAVL1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

HuR/ELAV1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ELAVL1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ELAVL1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de HuR/ELAV1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ELAVL1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de HuR/ELAV1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via HuR/ELAV1 em células tumorais com expressão de ELAVL1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.