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HuCCRISPR激活质粒(h) | sc-400172-ACT | 20 µg | $397.00 |
ELAVL3(HuC)是一种在神经元中富集的 RNA 结合蛋白,能够识别靶转录本中的富 AU 元件,从而调控 mRNA 的稳定性、剪接与翻译,支持神经元的分化与维持。HuC 通过塑造转录后层面的基因表达程序,协同调控 RNA 代谢,进而促进神经发生、神经突起生长以及突触功能。ELAVL3 的表达或定位失调会扰乱神经元稳态,并已在神经发育与神经退行性疾病的生物学研究中受到关注。作为终末分裂(后有丝分裂)神经元的标志物,HuC 常用于在人源细胞模型中研究谱系承诺与神经元状态变化。
HuC CRISPR激活质粒(h)提供了一种靶向、非破坏性的方法,可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性ELAVL3的表达。
HuC CRISPR激活质粒(h)是一个由三条质粒组成的协同激活介导(SAM)系统,旨在对人类细胞系中的ELAVL3基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变(D10A 和 N863A)的无催化活性的 Cas9(dCas9)为核心,这些突变消除了核酸酶活性,同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合,并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用,并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA,其与两个MS2 RNA适配体融合,这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点,并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送,以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后,SAM复合物结合于ELAVL3转录起始位点上游约200 bp处,VP64、p65和HSF1在此协同作用,招募转录 machinery并驱动内源性HuC表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同, dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列,从而保留了原生的ELAVL3位点,并能够研究内源性位点上依赖于HuC的转录反应,使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在ELAVL3表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟HuC通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。