HuB Double Nickaseプラスミド (h): sc-400169-NIC

ELAVL2（HuB）は、Hu/ELAVファミリーに属するニューロンで豊富に発現するRNA結合タンパク質で、標的転写産物中のAUリッチエレメントを認識し、mRNAの安定性、選択的スプライシング、翻訳を制御します。転写後段階の遺伝子発現プログラムを形成することで、HuBは神経分化、軸索誘導、シナプス機能、活動依存的可塑性に影響を与え、RNAプロセシングや局所翻訳を制御する経路と交差します。ELAVL2の発現や機能の異常は、神経発達および神経変性の文脈で観察される神経細胞の遺伝子ネットワーク変化と関連づけられており、RNA代謝と神経細胞表現型を結び付ける機構の研究において重要です。HuBを実験的に操作することは、ヒト神経モデルにおいてRNA結合タンパク質がトランスクリプトーム動態をどのように協調的に制御するかを検証するための手段となります。

HuB ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における ELAVL2 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、ELAVL2内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、ELAVL2の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、ELAVL2が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。