HuB CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-400169

概要

ELAVL2（HuB）は、AUリッチ配列（ARE）を認識するELAV/Huファミリーの神経細胞で高発現するRNA結合タンパク質であり、pre-mRNAのプロセシング、mRNAの安定性、局在、翻訳を制御する。転写後段階での遺伝子発現プログラムを形成することで、HuBは神経新生や細胞骨格ダイナミクスに関与する転写産物の制御を通じて、神経分化、シナプス発達、活動依存的可塑性に寄与する。ELAVL2に関連するRNAレギュロンは、細胞運命の決定やストレス応答を制御する経路と交差しており、神経発達性疾患や神経変性疾患の文脈、ならびに一部の神経系悪性腫瘍において発現パターンの変化が報告されている。これらの特徴により、ELAVL2は、RNA代謝が神経細胞のアイデンティティや機能障害にどのように影響するかを解明するための有用な結節点となる。

HuB CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるELAVL2遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、ELAVL2内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、ELAVL2のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、HuBタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、HuBシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、ELAVL2欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• HuBの機能に不可欠なELAVL2エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、ELAVL2ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• HuB CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびHuB CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、ELAVL2遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  HuB HDRプラスミド（h）および HuB HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはELAVL2ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のELAVL2標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。