HSPC171 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-412030-ACT

TMEM208はヒト膜タンパク質HSPC171をコードしており、小胞体（ER）に関連する因子として、ER恒常性の維持や、タンパク質恒常性（プロテオスタシス）および代謝ストレスに対する適応応答の調整に関与すると考えられています。TMEM208は、ERの構造や、小胞体ストレス応答（UPR）経路に結び付いたシグナル出力に影響を与えることで、タンパク質品質管理、脂質の取り扱い、ストレス誘導性の転写プログラムといった下流過程にも影響し得ます。ERストレスシグナルの異常やプロテオスタシスの破綻は、がん、神経変性疾患、代謝性疾患で繰り返し認められる特徴であり、TMEM208/HSPC171は、ER機能を細胞の生存、分化、炎症性シグナルへと結び付ける機序の解明において重要な研究対象となります。さらに、制御的役割を担う可能性のある膜貫通成分として、オルガネラ常在ネットワークのマッピングや、細胞種ごとの文脈依存的な脆弱性（依存性）の同定という観点からも注目されています。

HSPC171 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性TMEM208の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

HSPC171 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における TMEM208 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はTMEM208転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性HSPC171の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のTMEM208遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるHSPC171依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびTMEM208発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるHSPC171経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。