HSPA8/HSC70 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-418508

Visão geral

HSPA8 (HSC70) é uma chaperona molecular da família HSP70 expressa constitutivamente, que sustenta a proteostase ao promover, de forma dependente de ATP, o dobramento, o redobramento e a triagem de proteínas recém-sintetizadas ou danificadas por estresse. Participa de vias de controle de qualidade proteica, incluindo a autofagia mediada por chaperona (CMA) via LAMP2A lisossomal, a endocitose e o desrevestimento da clatrina, e a regulação da dinâmica de grânulos de estresse, influenciando assim as respostas celulares ao estresse proteotóxico e metabólico. Por meio de interações com co-chaperonas e com o sistema ubiquitina–proteassoma, a HSPA8 ajuda a governar a renovação de proteínas, a homeostase de organelas e a robustez da sinalização em diversos tipos celulares. A desregulação de redes de chaperonas ligadas à HSPA8 tem sido associada à biologia da agregação proteica e a programas alterados de adaptação ao estresse observados em contextos de pesquisa sobre neurodegeneração e câncer.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO HSPA8/HSC70 (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene HSPA8 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do HSPA8, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do HSPA8 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína HSPA8/HSC70.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de HSPA8 para a investigação da sinalização de HSPA8/HSC70, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) HSPA8 críticos para a função HSPA8/HSC70
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos HSPA8 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo HSPA8/HSC70 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo HSPA8/HSC70 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus HSPA8. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo HSPA8/HSC70 Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR HSPA8/HSC70 (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia HSPA8 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo HSPA8 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.