HSPA8/HSC70 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-418508

概要

HSPA8（HSC70）は、HSP70ファミリーに属する分子シャペロンで、恒常的に発現しており、新生タンパク質やストレスで損傷したタンパク質のATP依存的な折り畳み・再折り畳み・選別（トリアージ）を促進することで、プロテオスタシス（タンパク質恒常性）の維持を支えます。リソソーム膜タンパク質LAMP2Aを介するシャペロン介在性オートファジー（CMA）をはじめ、エンドサイトーシスやクラスリン被覆の脱被覆、ストレス顆粒ダイナミクスの制御などのタンパク質品質管理経路に関与し、プロテオトキシックストレスおよび代謝ストレスに対する細胞応答に影響を与えます。共シャペロンやユビキチン–プロテアソーム系との相互作用を通じて、HSPA8は多様な細胞種におけるタンパク質ターンオーバー、オルガネラ恒常性、シグナル伝達の頑健性の制御にも寄与します。HSPA8に連なるシャペロンネットワークの機能破綻は、タンパク質凝集の生物学や、神経変性疾患およびがん関連研究の文脈で観察されるストレス適応プログラムの変化と関連づけられています。

HSPA8/HSC70 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるHSPA8遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、HSPA8内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、HSPA8のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、HSPA8/HSC70タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、HSPA8/HSC70シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、HSPA8欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• HSPA8/HSC70の機能に不可欠なHSPA8エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、HSPA8ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• HSPA8/HSC70 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびHSPA8/HSC70 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、HSPA8遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  HSPA8/HSC70 HDRプラスミド（h）および HSPA8/HSC70 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはHSPA8ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のHSPA8標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。