HSPA6 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400870-ACT

HSPA6 は、HSP70 ファミリーに属するストレス誘導性タンパク質をコードしており、ATP 依存性の分子シャペロンとして、新生タンパク質や損傷タンパク質を安定化し、リフォールディング（再折りたたみ）を促進し、タンパク質毒性ストレス下での凝集を防ぎます。HSPA6 は、熱ショックやその他の細胞障害刺激によって、熱ショック因子（HSF）を介した転写プログラムにより迅速に発現が上昇し、小胞体ストレス応答（UPR）、ユビキチン‐プロテアソーム系による分解、オートファジーと交差するプロテオスタシス（タンパク質恒常性）ネットワークに関与します。タンパク質品質管理能を規定することから、HSPA6 の発現変動は、酸化ストレス、炎症、細胞傷害といった文脈でしばしば解析対象となります。シャペロン活性の異常やプロテオスタシス障害は、神経変性、がん細胞のストレス適応、組織損傷モデルなどに広く関連するため、HSPA6 はストレス生物学研究において有用な指標であると同時に調節因子にもなります。

HSPA6 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性HSPA6の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

HSPA6 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における HSPA6 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はHSPA6転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性HSPA6の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のHSPA6遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるHSPA6依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびHSPA6発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるHSPA6経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。