HSP 56 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403455-ACT

FKBP4 codifica a imunofilina FKBP52 (HSP56), uma isomerase peptidil-prolil cis–trans e co-chaperona de HSP90 que regula o dobramento, a maturação e o tráfego de proteínas clientes. A HSP56 atua em complexos multiproteicos de chaperonas que modulam a sinalização de receptores de hormônios esteroides, incluindo as vias dos receptores de glicocorticoides, andrógenos e progesterona, influenciando a estabilidade do receptor, a translocação nuclear e a atividade transcricional. Por meio de interações mediadas por TPR com a HSP90 e outras co-chaperonas, a FKBP4 integra a proteostase responsiva ao estresse com programas de transdução de sinais que moldam o crescimento e a diferenciação celular. Redes chaperona–co-chaperona desreguladas envolvendo FKBP4 têm sido associadas a alterações na sinalização endócrina e a fenótipos de homeostase proteica relevantes para a biologia do câncer e a pesquisa em neurodegeneração.

HSP 56 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de FKBP4 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

HSP 56 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus FKBP4 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição FKBP4, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de HSP 56. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus FKBP4 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de HSP 56 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via HSP 56 em células tumorais com expressão de FKBP4 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.