HSP 27 Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-400285-NIC
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- HSP 27O plasmídeo de dupla Nickase (h) consiste num par de plasmídeos cada um contem D10A com mutação na nuclease Cas9 nuclease e um alvo especifico de RNA guia com 20 na (gRNA), criado para nocautear a expressão genética com maior especificidade do que o seu correspondente CRISPR/Cas9 KO
- Sequencias pareadas de gRNA são de aproximadamente 20 bp para permitir que os cortes duplos no DNA genômico mediados pela Casp ocorram com especificidade , o que se assemelha ao corte pela DSB
- Cada plasmídeo pertencente ao par de plasmídeos contem um gene de resistência a puromicina para seleção; o outro plasmídeo do par contem um marcador de GFP para a visualização e confirmação da transfecção
- O Plasmídeo Double Nickase HSP 27 (h) e o Plasmídeo Double Nickase HSP 27 (h2) codificam designs distintos de pares de gRNA direcionados para HSPB1. Um ou ambos os desenhos podem estar disponíveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:HSP 27 Anticorpo (F-4): sc-13132
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
HSP 27 Plasmídeo duplo de Nickase (h) | sc-400285-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
HSP 27 Plasmídeo duplo de Nickase (h2) | sc-400285-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
HSPB1 codifica a pequena proteína de choque térmico HSP27, uma chaperona molecular independente de ATP que estabiliza proteínas desnaturadas, sustenta a proteostase e modula a dinâmica do citoesqueleto por meio de interações com actina e filamentos intermediários. A HSP27 é induzida por estresse celular via sinalização do fator de choque térmico e participa de respostas ao estresse oxidativo, da regulação da apoptose e do controle da agregação proteica. Por meio dessas funções, a HSPB1 influencia vias ligadas à inflamação, à sobrevivência celular e ao remodelamento adaptativo ao estresse, o que a torna relevante para estudos de neurodegeneração, lesão por estresse cardiovascular e tolerância ao estresse em células tumorais. Alterações na expressão de HSPB1 ou no seu estado de fosforilação têm sido associadas a mudanças na estabilidade do proteoma e nas saídas de sinalização de estresse em múltiplos contextos de doença.
HSP 27 O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus HSPB1 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de HSPB1. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função HSPB1. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.
Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com HSPB1 interrompido.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.