HSP 20 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403164-ACT

HSPB6 codifica a pequena proteína de choque térmico HSP 20, uma chaperona molecular induzida por estresse que modula o dobramento de proteínas, a dinâmica do citoesqueleto e a proteostase. Em tipos celulares de músculo liso e do sistema cardiovascular, a HSP 20 participa de programas de sinalização ligados às vias de cAMP/PKA e de óxido nítrico–cGMP, com efeitos dependentes de fosforilação sobre a remodelação de actina e o tônus contrátil. A HSP 20 também se relaciona com a apoptose e com respostas ao estresse oxidativo, influenciando a sobrevivência celular em condições proteotóxicas e inflamatórias. A expressão ou sinalização desregulada de HSPB6 tem sido associada a alterações na reatividade vascular, na adaptação de cardiomiócitos ao estresse e na disfunção do músculo liso, tornando-a relevante para estudos mecanísticos de biologia cardiovascular e das vias aéreas.

HSP 20 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de HSPB6 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

HSP 20 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus HSPB6 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição HSPB6, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de HSP 20. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus HSPB6 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de HSP 20 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via HSP 20 em células tumorais com expressão de HSPB6 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.