HSBP1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-416835-ACT

A HSBP1 humana (heat shock factor binding protein 1) é um pequeno regulador de estrutura coiled-coil da resposta ao choque térmico que se liga ao fator de choque térmico 1 (HSF1) e modula a trimerização do HSF1 e sua atividade transcricional. Por meio desse controle de retroalimentação negativa, a HSBP1 ajuda a ajustar programas de proteostase, incluindo a indução de chaperonas como HSP70/HSP90 e vias mais amplas de adaptação ao estresse ligadas ao dobramento de proteínas, à tradução e ao controle de qualidade. Alterações na atividade da HSBP1 podem mudar a tolerância celular ao estresse proteotóxico e interagir com processos relevantes para a biologia tumoral, a neurodegeneração e outras condições caracterizadas por sinalização de estresse desregulada. Esses papéis tornam a HSBP1 um alvo útil para estudar a dinâmica da via de choque térmico, a resiliência ao estresse e o amortecimento de redes transcricionais em células humanas.

HSBP1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de HSBP1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

HSBP1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus HSBP1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição HSBP1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de HSBP1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus HSBP1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de HSBP1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via HSBP1 em células tumorais com expressão de HSBP1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.