HS3ST5 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-415157

概要

HS3ST5は、ヘパラン硫酸プロテオグリカンの生合成過程においてグルコサミン残基の3-O-硫酸化を触媒する、ゴルジ体局在性酵素であるヘパラン硫酸‐グルコサミン3-O-スルホトランスフェラーゼ5をコードします。この修飾はヘパラン硫酸の微細構造（ファインストラクチャー）を規定するのに寄与し、リガンド結合特性を形成することで、細胞間コミュニケーション、接着、ならびに細胞外マトリックス内でのモルフォゲン分布に影響を及ぼします。ヘパラン硫酸依存的な相互作用を調節することにより、HS3ST5は発生や組織恒常性を制御するFGF、Wnt、Hedgehog、ケモカインネットワークなどのシグナル伝達経路に影響し得ます。ヘパラン硫酸の硫酸化パターンの破綻は、増殖因子の利用可能性の変化、炎症、腫瘍微小環境のリモデリングと関連づけられており、HS3ST5は疾患関連のグリコサミノグリカン変化の機序解明研究において重要です。

HS3ST5 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるHS3ST5遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、HS3ST5内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、HS3ST5のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、HS3ST5タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、HS3ST5シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、HS3ST5欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• HS3ST5の機能に不可欠なHS3ST5エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、HS3ST5ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• HS3ST5 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびHS3ST5 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、HS3ST5遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  HS3ST5 HDRプラスミド（h）および HS3ST5 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはHS3ST5ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のHS3ST5標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。