HS3ST1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-405358

概要

HS3ST1は、ヘパラン硫酸-グルコサミン 3-O-硫酸転移酵素1をコードする遺伝子であり、ゴルジ体に局在する酵素としてヘパラン硫酸鎖の3-O-硫酸化を触媒し、タンパク質—グリコサミノグリカン相互作用を調節する希少なモチーフを形成します。ヘパラン硫酸の微細構造を作り分けることで、HS3ST1は細胞外マトリックスの構築や、細胞表面の共受容体としての機能に影響を与え、成長因子・ケモカイン・モルフォゲンなどが関与するシグナル伝達経路の調整に寄与します。ヘパラン硫酸の硫酸化パターンの変化は、細胞接着、遊走、炎症性シグナルの変動と関連しており、これらは腫瘍生物学や神経発達表現型でしばしば重要となる過程です。ヘパラン硫酸構造を規定する因子として、HS3ST1は多様な細胞環境におけるリガンド結合および下流シグナルの動態を制御する役割の解明を目的に研究されています。

HS3ST1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるHS3ST1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、HS3ST1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、HS3ST1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、HS3ST1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、HS3ST1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、HS3ST1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• HS3ST1の機能に不可欠なHS3ST1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、HS3ST1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• HS3ST1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびHS3ST1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、HS3ST1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  HS3ST1 HDRプラスミド（h）および HS3ST1 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはHS3ST1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のHS3ST1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。