HRF CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402606-ACT

ヒトTPT1は、ヒスタミン放出因子（HRF）をコードしており、細胞増殖、生存、ストレス適応に関与するとされる、保存性の高い多機能タンパク質である。HRFは、翻訳制御、微小管ダイナミクス、アポトーシス制御に関連する過程に関与し、またヒスタミン関連経路を介して免疫シグナル伝達や炎症応答に影響を与え得る。TPT1/HRFの発現異常は、がん生物学、アレルギー性炎症、その他の免疫介在性疾患など、複数の疾患文脈で報告されており、そこでは増殖、サイトカインネットワーク、細胞のレジリエンス（抵抗性）を調節し得る。これらの特性により、TPT1は、プロテオスタシスとストレス応答を免疫・腫瘍関連表現型に結びつける経路を解析するうえで有用な標的となる。

HRF CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性TPT1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

HRF CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における TPT1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はTPT1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性HRFの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のTPT1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるHRF依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびTPT1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるHRF経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。