HRASLS2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-412404-ACT

HRASLS2 (supressor tipo HRAS 2), também conhecido como H-rev107-3, codifica uma enzima associada à membrana com atividades de fosfolipase A1/2 e de aciltransferase, que remodela a composição de fosfolipídios e influencia a sinalização mediada por lipídios. Ao regular a liberação de ácidos graxos e o turnover de fosfolipídios, o HRASLS2 pode afetar a dinâmica de membranas, o tráfego vesicular e respostas celulares ligadas ao controle de crescimento e à diferenciação. Alterações na expressão de HRASLS2 têm sido estudadas no contexto de redes de sinalização oncogênica e da reprogramação do metabolismo lipídico, nas quais mudanças na homeostase de lipídios de membrana podem modular vias de proliferação e de resposta ao estresse. Sua conexão funcional com fenótipos celulares associados a Ras o torna relevante para estudos mecanísticos de biologia tumoral, metabolismo e transições de estado celular.

HRASLS2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de HRASLS2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

HRASLS2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus HRASLS2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição HRASLS2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de HRASLS2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus HRASLS2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de HRASLS2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via HRASLS2 em células tumorais com expressão de HRASLS2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.