HPS-1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-404200-ACT

HPS1は、エンドソーム輸送や特殊な分泌区画の成熟を制御する「リソソーム関連オルガネラ形成複合体3（BLOC-3）」の中核構成因子であるHPS-1をコードします。HPS-1はRab32およびRab38に対するグアニンヌクレオチド交換因子（GEF）として機能することで、リソソームおよびリソソーム関連オルガネラへのカーゴ送達の協調を助け、メラノソーム形成、血小板の濃染顆粒（dense granule）生合成、ならびに関連する小胞動態に影響を与えます。HPS1の破綻はオルガネラ形成や膜輸送を乱し、色素異常や出血傾向を伴うヘルマンスキー・パドラック症候群の表現型とを結び付ける機序的な関連を与えます。これらの機能により、HPS1はヒト細胞におけるエンドリソソーム経路、Rab GTPase制御、オルガネラ特異的なカーゴ選別を研究するうえで有用な結節点となります。

HPS-1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性HPS1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

HPS-1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における HPS1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はHPS1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性HPS-1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のHPS1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるHPS-1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびHPS1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるHPS-1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。