HPK1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402367-ACT

O MAP4K1 humano codifica a hematopoietic progenitor kinase 1 (HPK1), uma quinase de serina/treonina que atua como reguladora a montante de redes de sinalização a jusante de receptores de antígeno e de citocinas. A HPK1 integra sinais provenientes de complexos proximais de receptores imunes para modular cascatas de MAPK e programas transcricionais ligados ao NF-κB, moldando limiares de ativação, duração do sinal e estados de fosforilação de proteínas. Por meio dessas vias, o MAP4K1 influencia processos celulares como sinalização por receptores, regulação transcricional e dinâmica de sinalização responsiva ao estresse. A atividade e os padrões de expressão desregulados da HPK1 são estudados no contexto de desequilíbrios na sinalização imune e da biologia associada à inflamação, com relevância adicional para interações tumor–sistema imune na pesquisa em câncer.

HPK1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de MAP4K1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

HPK1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus MAP4K1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição MAP4K1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de HPK1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus MAP4K1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de HPK1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via HPK1 em células tumorais com expressão de MAP4K1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.