HP1γ Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-417205-ACT

CBX3 codifica a proteína 1 da heterocromatina gama (HP1γ), um fator associado à cromatina que se liga à metilação da lisina 9 da histona H3 e ajuda a organizar a estrutura da cromatina em níveis superiores. A HP1γ participa da formação de heterocromatina, da regulação transcricional, da replicação do DNA e da resposta a danos no DNA por meio de interações com escritores/leitores epigenéticos e com a maquinaria de processamento de RNA. Ao modular a acessibilidade da cromatina e a estabilidade do genoma, o CBX3 influencia a progressão do ciclo celular, programas de diferenciação e redes de expressão gênica responsivas ao estresse. A atividade desregulada da HP1γ e padrões alterados de expressão de CBX3 têm sido associados a estados epigenéticos aberrantes observados em diversos contextos de câncer e doenças do neurodesenvolvimento, sustentando seu uso como um nó mecanístico em estudos de cromatina e manutenção do genoma.

HP1γ O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CBX3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

HP1γ O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CBX3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CBX3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de HP1γ. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CBX3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de HP1γ no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via HP1γ em células tumorais com expressão de CBX3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.