HoxD13 Double Nickaseプラスミド (h): sc-404471-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- HoxD13 Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- HoxD13ダブルニカースプラスミド（h）およびHoxD13ダブルニカースプラスミド（h2）は、HOXD13を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
HoxD13 Double Nickaseプラスミド (h) | sc-404471-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
HoxD13 Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-404471-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
HOXD13は、胚発生における位置情報の決定やパターニングを制御するホメオボックス型転写因子HoxD13をコードしており、とりわけ四肢および末端付属器の形態形成で重要な役割を担います。HoxD13は保存性の高いホメオドメインを介してDNAに結合し、分節化、軟骨形成、分化プログラムを司る遺伝子制御ネットワークを統合的に調整します。また、組織パターニングの過程で、HOXクラスター全体の制御やSHH・WNTなどのモルフォゲンシグナルとも連携します。HOXD13の機能破綻や発現制御異常は発生過程の転写プログラムを変化させ、合指多指症（synpolydactyly）を含む先天性四肢奇形と関連することが知られており、ヒト発生生物学における遺伝子型と表現型の関係を研究するうえで有用な標的です。
HoxD13 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における HOXD13 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、HOXD13内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、HOXD13の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、HOXD13が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。