HoxC10 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-431637-ACT

Hoxc10 codifica o fator de transcrição homeobox HoxC10, uma proteína HOX posterior que controla o padrão embrionário e a identidade posicional ao regular programas de expressão gênica do desenvolvimento. Em camundongos, a atividade de HoxC10 contribui para a morfogênese do eixo corporal e dos membros e influencia a diferenciação mesenquimal por meio de redes transcricionais que se cruzam com as vias de sinalização WNT, BMP e do ácido retinoico. A desregulação da expressão de genes HOX é frequentemente associada a alterações na especificação de linhagens, proliferação aberrante e fenótipos invasivos em contextos relevantes de doença, tornando Hoxc10 um nó útil para estudar erros de padronização do desenvolvimento e reprogramação transcricional oncogênica. HoxC10 também oferece um modelo acessível para investigar o controle epigenético de clusters HOX e as transições do estado da cromatina durante a diferenciação.

HoxC10 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Hoxc10 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

HoxC10 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Hoxc10 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Hoxc10, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de HoxC10. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Hoxc10 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de HoxC10 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via HoxC10 em células tumorais com expressão de Hoxc10 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.