HoxB5 Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (m2): sc-420914-LAC-2

O gene Hoxb5 do camundongo codifica o fator de transcrição homeobox HOXB5, um regulador que se liga ao DNA de maneira específica de sequência e que ajuda a estabelecer o padrão ântero-posterior e a identidade segmentar durante a embriogênese. O HOXB5 modula programas de expressão gênica que controlam a diferenciação mesodérmica e neural, coordenando vias de desenvolvimento envolvidas na morfogênese dos tecidos, na formação do sistema vascular e do trato respiratório e na especificação de linhagens hematopoéticas. A atividade desregulada de HOXB5 e o desequilíbrio na rede de genes HOX estão ligados a anomalias do desenvolvimento e têm sido associados a estados transcricionais oncogênicos em modelos de neoplasias hematológicas, tornando Hoxb5 um lócus útil para investigar diferenciação, autorrenovação e comprometimento de linhagem. A edição gênica de Hoxb5 em sistemas murinos dá suporte a estudos mecanísticos de elementos cis-regulatórios, de circuitos transcricionais e de fenotipagem do desenvolvimento in vivo ao longo da organogênese e em contextos de células-tronco/progenitoras.

As Partículas de Ativação Lentivirais HoxB5 (m2) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de Hoxb5 numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais HoxB5 (m2) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição Hoxb5, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de HoxB5. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo Hoxb5 e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.