HoxB5 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-420914-ACT

Hoxb5 codifica o fator de transcrição homeobox HoxB5, um regulador de ligação ao DNA dependente de sequência que estabelece o padrão do eixo ântero-posterior e organiza a identidade regional durante a embriogênese. Em camundongos, HoxB5 ajuda a coordenar redes regulatórias de genes do desenvolvimento que controlam a especificação de células progenitoras, o momento da diferenciação e a morfogênese dos tecidos, integrando-se a programas mais amplos do cluster HOX e ao controle transcricional mediado pela cromatina. Sua atividade influencia vias que governam a organogênese e processos associados à hematopoiese e à crista neural, em que alterações na expressão de HOX são frequentemente estudadas no contexto de diferenciação desregulada e estados proliferativos. Como os fatores HOX ocupam posições altas nas hierarquias regulatórias, Hoxb5 é amplamente utilizado para investigar circuitos transcricionais do desenvolvimento e mecanismos de programação de linhagens relevantes para modelos de doença.

HoxB5 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Hoxb5 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

HoxB5 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Hoxb5 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Hoxb5, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de HoxB5. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Hoxb5 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de HoxB5 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via HoxB5 em células tumorais com expressão de Hoxb5 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.