HoxB4 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404013-ACT

HOXB4 codifica o fator de transcrição homeobox HoxB4, um regulador de ligação ao DNA que controla programas de padronização ântero-posterior durante o desenvolvimento embrionário e ajuda a manter redes transcricionais que especificam linhagens em populações hematopoéticas e em outros progenitores. Como parte da circuitaria regulatória dos genes HOX, o HoxB4 influencia o estado da cromatina e a expressão coordenada de genes de diferenciação e autorrenovação, interagindo com vias que governam decisões de destino de células-tronco e o timing do desenvolvimento. A expressão desregulada de HOXB4 e a atividade alterada do cluster HOX têm sido relatadas em múltiplas malignidades, incluindo cânceres hematológicos, nos quais programas transcricionais desenvolvimentais aberrantes podem contribuir para diferenciação prejudicada e sinalização proliferativa. Essas propriedades tornam o HOXB4 um nó útil para dissecar o controle gênico do desenvolvimento, a regulação epigenética e a reprogramação transcricional oncogênica em modelos celulares humanos.

HoxB4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de HOXB4 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

HoxB4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus HOXB4 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição HOXB4, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de HoxB4. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus HOXB4 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de HoxB4 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via HoxB4 em células tumorais com expressão de HOXB4 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.