Plásmido CRISPR de Activación (h) HoxB2: sc-404533-ACT

HOXB2 codifica el factor de transcripción con homeobox HoxB2, un regulador de unión al ADN que ayuda a establecer el patrón anteroposterior y la identidad segmentaria durante el desarrollo embrionario, en particular en linajes del rombencéfalo y derivados de la cresta neural. HoxB2 modula programas de expresión génica que controlan la especificación del destino celular, la diferenciación y la respuesta a morfógenos mediante redes transcripcionales HOX e interacciones con cofactores como PBX y MEIS. La expresión desregulada de HOXB2 se ha asociado con alteraciones en la señalización del desarrollo y estados transcripcionales aberrantes en contextos de enfermedad humana, incluidos cánceres en los que los programas génicos HOX pueden influir en la proliferación, la migración y la plasticidad de linaje. Como regulador transcripcional, HoxB2 constituye un nodo manejable para investigar circuitos de regulación génica y la reactivación de vías del desarrollo en sistemas modelo.

HoxB2 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de HOXB2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

HoxB2 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus HOXB2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional HOXB2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de HoxB2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo HOXB2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de HoxB2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía HoxB2 en células tumorales con expresión de HOXB2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.