HoxB2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404533-ACT

HOXB2 codifica o fator de transcrição homeobox HoxB2, um regulador de ligação ao DNA que ajuda a estabelecer o padrão ântero-posterior e a identidade segmentar durante o desenvolvimento embrionário, particularmente no rombencéfalo e em linhagens derivadas da crista neural. O HoxB2 modula programas de expressão gênica que controlam a especificação do destino celular, a diferenciação e a responsividade a morfógenos por meio de redes transcricionais de HOX e de interações com cofatores como PBX e MEIS. A expressão desregulada de HOXB2 tem sido associada a alterações na sinalização do desenvolvimento e a estados transcricionais aberrantes em contextos de doenças humanas, incluindo cânceres nos quais programas gênicos de HOX podem influenciar proliferação, migração e plasticidade de linhagem. Como regulador transcricional, o HoxB2 constitui um ponto acessível para investigar circuitos de regulação gênica e a reativação de vias do desenvolvimento em sistemas modelo.

HoxB2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de HOXB2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

HoxB2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus HOXB2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição HOXB2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de HoxB2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus HOXB2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de HoxB2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via HoxB2 em células tumorais com expressão de HOXB2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.