HoxA5 Double Nickaseプラスミド (h): sc-402499-NIC

HOXA5は、ホメオボックス型転写因子HoxA5をコードしており、配列特異的にDNAへ結合する制御因子として、発生過程における前後軸（anterior–posterior）のパターニングの確立を助け、細胞分化プログラムの協調的な制御に関与します。成体組織では、HoxA5は上皮‐間葉状態、細胞外マトリックスの組織化、ならびに状況依存的な細胞周期やアポトーシス応答を制御する転写ネットワークに影響を及ぼします。HOX遺伝子の制御回路の一部として、クロマチン制御や系譜規定（lineage-specifying）経路と統合され、組織アイデンティティやリモデリングの形成に寄与します。HOXA5の発現異常やエピジェネティックなサイレンシングは、複数の組織コンテキストにおいて分化状態の変化や腫瘍関連の転写リプログラミングと関連づけられており、疾患モデル研究における機構的ハブ（mechanistic node）としての利用を支持しています。

HoxA5 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における HOXA5 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、HOXA5内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、HOXA5の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、HOXA5が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。