HoxA10 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-420900-ACT

Hoxa10 codifica o fator de transcrição homeobox HoxA10, um regulador de ligação ao DNA específico de sequência que estabelece o padrão do eixo ântero-posterior durante a embriogênese e ajuda a especificar a identidade regional nos sistemas urogenital e hematopoético em desenvolvimento. Em tecidos adultos, o HoxA10 contribui para programas de comprometimento de linhagem e diferenciação ao coordenar redes transcricionais com cofatores como PBX e MEIS, influenciando o estado da cromatina e a expressão gênica a jusante. A expressão alterada de HOXA10 tem sido associada a anomalias do desenvolvimento e a estados de diferenciação desregulados, tornando-o um ponto útil para estudar o controle transcricional da morfogênese e decisões de destino celular em modelos murinos. Sua atividade se cruza com vias que governam proliferação e diferenciação, apoiando pesquisas sobre regulação gênica dependente do contexto no desenvolvimento e em fenótipos relevantes para doenças.

HoxA10 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Hoxa10 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

HoxA10 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Hoxa10 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Hoxa10, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de HoxA10. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Hoxa10 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de HoxA10 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via HoxA10 em células tumorais com expressão de Hoxa10 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.