Hox11 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-404662-ACT

TLX1（Hox11）は、胚発生におけるパターン形成や系譜（ラインエージ）決定を制御するホメオボックス型転写因子であり、造血分化プログラムにおいて特に重要な役割を担います。HOX応答配列に結合することで、Hox11は発生シグナル伝達やクロマチンリモデリングと交差する転写ネットワークを調節し、増殖および細胞運命の決定を制御します。TLX1の発現異常は発生関連遺伝子の発現状態の変化と関連し、T細胞急性リンパ芽球性白血病との関連も報告されていることから、がん性の転写回路再配線を研究するためのノードとして有用です。ヒト細胞モデルにおいてTLX1は、HOXにより駆動される遺伝子制御回路や、文脈依存的な分化表現型を検討するための扱いやすい制御因子として機能します。

Hox11 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性TLX1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Hox11 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における TLX1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はTLX1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Hox11の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のTLX1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるHox11依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびTLX1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるHox11経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。