HOS CRISPR Activationプラスミド (h): sc-404203-ACT

FBXW11 は、ヒトの F-box/WD リピートタンパク質 HOS（β-TrCP2 とも呼ばれる）をコードしており、リン酸化された制御タンパク質のプロテアソーム分解を誘導する SCF（SKP1–CUL1–F-box）E3 ユビキチンリガーゼ複合体における基質認識コンポーネントとして機能します。HOS は重要なシグナル伝達メディエーターのユビキチン化を介して、IκB ファミリータンパク質を介した NF-κB シグナル伝達や、Wnt/β-カテニン制御などの経路に影響を与え、その結果として炎症応答、細胞周期の進行、細胞運命決定を形作ります。FBXW11 の活性や基質認識が変化すると、プロテオスタシスやシグナル強度のバランスが乱れ、この軸ががんに伴うシグナル伝達の再配線や免疫／炎症表現型と関連することが示唆されます。ユビキチン経路における結節因子として、FBXW11 は転写制御、リン酸化依存性デグロン、経路間クロストークといった文脈でしばしば研究されています。

HOS CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性FBXW11の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

HOS CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における FBXW11 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はFBXW11転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性HOSの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のFBXW11遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるHOS依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびFBXW11発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるHOS経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。