HOOK1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-404872-ACT

ヒトのHOOK1は、微小管結合性のアダプタータンパク質をコードしており、ダイニン–ダイナクチンモーターをエンドソームや各種オルガネラのカーゴに連結することで、微小管のマイナス端方向への輸送と、膜輸送の空間的な組織化を支えています。微小管依存的なダイナミクスにおける役割を通じて、HOOK1は中心体関連プロセス、一次繊毛の形成・維持、ならびにエンドソームからゴルジ体への輸送経路の協調にも寄与します。HOOK1により制御される輸送が攪乱されると、細胞極性、有糸分裂の進行、シグナルの区画化に影響し得るため、神経発生生物学、繊毛病に関連するメカニズム、そして多様な疾患状況で観察される細胞内輸送の破綻の研究において重要な対象となります。また、HOOK1の発現や機能の変化は、腫瘍細胞の挙動や、適切な細胞骨格の組織化に依存するゲノム安定性経路との関連でも検討されています。

HOOK1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性HOOK1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

HOOK1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における HOOK1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はHOOK1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性HOOK1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のHOOK1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるHOOK1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびHOOK1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるHOOK1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。