hnRNP E2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-402274

概要

PCBP2は、ヒトのRNA結合タンパク質hnRNP E2（一本鎖RNAに結合するpoly(C)結合因子）をコードしており、mRNAのスプライシング、安定性、核外輸送、翻訳を制御します。hnRNP E2は、転写後の遺伝子制御において、転写産物の運命やタンパク質産生量を規定するリボヌクレオタンパク質複合体を協調的に編成し、UTR依存的な翻訳抑制の調節やRNAプロセシング・プログラムの制御などに関与します。これらの働きを通じて、PCBP2は細胞のストレス応答、増殖、分化の経路に影響を与え、RNA代謝の破綻という文脈でしばしば研究対象となっています。PCBP2/hnRNP E2の機能または発現の変化は、RNA制御ネットワークを介したがん化シグナルや宿主—ウイルス相互作用の変化など、疾患に関連する表現型と結び付けられています。

hnRNP E2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるPCBP2遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、PCBP2内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、PCBP2のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、hnRNP E2タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、hnRNP E2シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、PCBP2欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• hnRNP E2の機能に不可欠なPCBP2エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、PCBP2ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• hnRNP E2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびhnRNP E2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、PCBP2遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  hnRNP E2 HDRプラスミド（h）および hnRNP E2 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはPCBP2ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のPCBP2標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。