hnRNP A/B Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403454-ACT

HNRNPAB codifica a ribonucleoproteína nuclear heterogênea humana A/B (hnRNP A/B), uma proteína de ligação a RNA que se associa a transcritos nascente para regular o splicing do pré‑mRNA, a poliadenilação alternativa, a estabilidade do mRNA e o transporte nucleocitoplasmático. A hnRNP A/B participa da montagem de complexos ribonucleoproteicos e coordena programas de regulação gênica pós-transcricional que moldam a progressão do ciclo celular e as respostas transcricionais a estresse. A desregulação de membros da família hnRNP, incluindo alterações na expressão de HNRNPAB ou em seus padrões de splicing, tem sido associada a redes aberrantes de processamento de RNA observadas em diversos contextos de doença, particularmente em fenótipos proliferativos e relacionados à neurodegeneração. Como resultado, HNRNPAB é frequentemente estudado em vias que governam o metabolismo de RNA, o controle global de splicing e a remodelação do transcriptoma.

hnRNP A/B O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de HNRNPAB sem alterar a sequência de ADN subjacente.

hnRNP A/B O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus HNRNPAB em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição HNRNPAB, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de hnRNP A/B. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus HNRNPAB nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de hnRNP A/B no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via hnRNP A/B em células tumorais com expressão de HNRNPAB silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.