HNF-6 Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (h): sc-401082-LAC

ONECUT1 codifica o fator nuclear de hepatócitos 6 (HNF-6), um fator de transcrição específico de sequência que coordena programas regulatórios de genes que governam a diferenciação epitelial e a organogênese, particularmente nas linhagens do fígado e do pâncreas. O HNF-6 integra redes transcricionais do desenvolvimento para controlar a atividade de promotores e enhancers envolvidos na especificação hepatobiliar, na expressão de genes do metabolismo de glicose e lipídios e na manutenção da identidade epitelial. A desregulação da atividade de ONECUT1/HNF-6 tem sido associada a alterações no desenvolvimento endócrino pancreático e à disfunção hepatobiliar, tornando-o relevante para o estudo do controle transcricional de vias metabólicas e do comprometimento de linhagem. Em modelos celulares humanos, a modulação de HNF-6 permite investigar circuitos regulatórios gênicos, transcrição dependente de cromatina e estados transcricionais associados a doenças.

As Partículas de Ativação Lentivirais HNF-6 (h) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de ONECUT1 numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais HNF-6 (h) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição ONECUT1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de HNF-6. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo ONECUT1 e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.