HNF-6 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-401082

Panoramica

ONECUT1 codifica il fattore nucleare epatocitario 6 (HNF-6), un fattore di trascrizione CUT homeobox che coordina programmi di regolazione genica nei tessuti derivati dall’endoderma, in particolare fegato e pancreas. HNF-6 modula la differenziazione epiteliale, la morfogenesi duttale e l’espressione di geni metabolici attraverso il controllo trascrizionale di vie di sviluppo e di percorsi epatobiliari, incluse interazioni (cross-talk) con la segnalazione Notch e TGF-β. Nelle cellule umane, un’alterata attività di ONECUT1 è stata associata a una compromissione dell’omeostasi del glucosio, dello sviluppo endocrino pancreatico e della funzione epatobiliare, rendendolo un bersaglio rilevante per lo studio delle perturbazioni delle reti trascrizionali. I suoi bersagli a valle e le interazioni cooperative con altri fattori di trascrizione epatici e pancreatici collocano HNF-6 come un nodo chiave per analizzare la specificazione di linea e la regolazione metabolica.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO HNF-6 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene ONECUT1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del ONECUT1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto ONECUT1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina HNF-6.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di ONECUT1 per lo studio della segnalazione di HNF-6, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni ONECUT1 critici per la funzione di HNF-6
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di ONECUT1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal HNF-6 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal HNF-6 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus ONECUT1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal HNF-6 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR HNF-6 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia ONECUT1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio ONECUT1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.