HNF-3β CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-420890

概要

Foxa2は、フォークヘッドボックス型転写因子HNF-3β（FOXA2）をコードしている。HNF-3βはパイオニア因子として凝縮したクロマチンに結合し、内胚葉の遺伝子制御プログラムの確立と維持に寄与する。マウスでは、HNF-3βが前腸および脊索の発生、肝膵系譜の運命決定、上皮分化を制御する転写ネットワークを統合的に調節し、Wnt、TGF-β/SMAD、Hedgehog、核内受容体を介した代謝などの経路からのシグナルを取り込む。成体組織においては、FOXA2は肝臓の代謝関連遺伝子を制御し、内分泌細胞および上皮細胞のアイデンティティを調節することで、糖・脂質恒常性に影響を与える。FOXA2活性の異常は、発生異常に加え、分化の変化、上皮の可塑性、代謝機能障害を伴う疾患関連状態と結び付けられており、転写制御の機序研究における有用性を支持している。

HNF-3β CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるFoxa2遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Foxa2内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Foxa2のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、HNF-3βタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、HNF-3βシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Foxa2欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• HNF-3βの機能に不可欠なFoxa2エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Foxa2ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• HNF-3β CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびHNF-3β CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Foxa2遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  HNF-3β HDRプラスミド（m）および HNF-3β HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはFoxa2ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のFoxa2標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。