HNF-3α CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400743-ACT

FOXA1（HNF-3α）は先駆（パイオニア）型のforkhead転写因子であり、凝縮したクロマチンに結合してアクセス可能な制御領域（レギュラトリー・ランドスケープ）を確立し、系譜特異的な遺伝子発現プログラムを協調的に制御します。ヒトの上皮組織では、分化・代謝・細胞周期進行を制御する転写ネットワークとホルモン受容体シグナルを統合し、エストロゲン受容体やアンドロゲン受容体依存性転写などの核内受容体経路との広範なクロストークも含まれます。FOXA1の活性はエンハンサー選択とクロマチンリモデリングに影響し、肝臓・肺・膵臓・乳腺上皮における発生および恒常性維持の過程を形作ります。FOXA1発現の異常やクロマチン結合プロファイルの変化は、ホルモン駆動性がんや、上皮アイデンティティの破綻と転写リプログラミングを特徴とする他の疾患において、しばしば研究対象となっています。

HNF-3α CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性FOXA1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

HNF-3α CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における FOXA1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はFOXA1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性HNF-3αの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のFOXA1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるHNF-3α依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびFOXA1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるHNF-3α経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。