HNF-1β Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400537-ACT

HNF1B codifica o fator de transcrição HNF‑1β, um regulador com homeodomínio essencial para a diferenciação epitelial e o desenvolvimento de órgãos, particularmente nas linhagens de rim, pâncreas e fígado. Ele controla redes gênicas envolvidas no transporte tubular, na polaridade celular e na homeostase metabólica, interagindo com vias que moldam a segmentação do néfron e a identidade do epitélio ductal. Alterações na expressão ou na função de HNF1B estão associadas a anomalias do desenvolvimento renal, fenótipos císticos e tubulointersticiais e desregulação do metabolismo da glicose, consistente com síndromes de diabetes monogênica. Em biologia do câncer, HNF‑1β é frequentemente estudado como um fator de linhagem e diferenciação em tumores epiteliais, nos quais pode influenciar programas transcricionais ligados à proliferação e às respostas ao estresse.

HNF-1β O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de HNF1B sem alterar a sequência de ADN subjacente.

HNF-1β O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus HNF1B em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição HNF1B, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de HNF-1β. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus HNF1B nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de HNF-1β no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via HNF-1β em células tumorais com expressão de HNF1B silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.