HMGCL Plasmide Double Nickase (h): sc-403841-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- HMGCL Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il HMGCL Double Nickase Plasmid (h) e il HMGCL Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira HMGCL. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: HMGCL Antibody (63Z): sc-100548
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
HMGCL Plasmide Double Nickase (h) | sc-403841-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
HMGCL Plasmide Double Nickase (h2) | sc-403841-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
HMGCL codifica la 3-idrossimetil-3-metilglutaril-CoA liasi, un enzima mitocondriale che catalizza la fase terminale della chetogenesi e del catabolismo della leucina convertendo l’HMG-CoA in acetoacetato e acetil-CoA. Questa attività collega la gestione mitocondriale dell’acetil-CoA all’equilibrio energetico cellulare durante il digiuno e altri stress metabolici, e si integra con vie più ampie che regolano l’ossidazione degli acidi grassi, l’anaplerosi e l’omeostasi redox. Alterazioni della funzione di HMGCL sono associate a errori congeniti del metabolismo che compromettono la produzione di corpi chetonici e la degradazione degli aminoacidi a catena ramificata, rendendolo rilevante per studi sull’adattamento metabolico e sulla fisiologia mitocondriale. In biologia del cancro e in immunometabolismo, il metabolismo dei chetoni dipendente da HMGCL è stato indagato come possibile contributore all’utilizzo dei nutrienti e agli stati di segnalazione in condizioni di ipossia o di limitazione dei nutrienti.
HMGCL Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus HMGCL nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di HMGCL. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di HMGCL. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con HMGCL interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.