HLA-F Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-410821
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- HLA-F O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico HLA-F, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:HLA-F Anticorpo (201A2H): sc-517640
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
HLA-F Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-410821 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
O HLA-F codifica uma molécula não clássica do MHC classe I que participa da vigilância imunológica ao modular as interações entre células apresentadoras de antígeno e linfócitos, por meio da ligação a receptores inibitórios e ativadores em células NK e em subpopulações de células T. Ao contrário das proteínas clássicas HLA-I, altamente polimórficas, o HLA-F apresenta dinâmicas de expressão distintas, incluindo retenção intracelular e aumento de expressão na superfície em condições de estresse celular, infeção ou estados de ativação, contribuindo para a modulação de checkpoints imunológicos e da tolerância. O HLA-F contribui para processos relacionados à apresentação de antígenos, à regulação de respostas citotóxicas e a mecanismos de evasão imune em tecidos inflamados e em microambientes tumorais. A expressão desregulada de HLA-F foi relatada em múltiplos contextos imunomediados e oncológicos, tornando-o relevante para dissecar vias que controlam a ativação imune, as respostas a interferão e o reconhecimento célula–célula.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO HLA-F (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene HLA-F em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do HLA-F, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do HLA-F na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína HLA-F.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de HLA-F para a investigação da sinalização de HLA-F, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) HLA-F críticos para a função HLA-F
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos HLA-F para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo HLA-F Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo HLA-F Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus HLA-F. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo HLA-F Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR HLA-F (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia HLA-F para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo HLA-F definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.