HLA-E Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (m): sc-437133-LAC

O gene murino H2-T-ps codifica a molécula não clássica do MHC de classe I HLA-E, uma proteína conservada de apresentação de antígenos que exibe principalmente peptídeos derivados de sequências líderes para regular a imunidade inata e adaptativa. A HLA-E interage com receptores inibitórios e ativadores em células NK e em subpopulações selecionadas de células T, moldando a vigilância imunológica, o licenciamento citotóxico e a tolerância nos tecidos. Sua expressão e seu repertório de peptídeos integram sinais das vias de processamento de antígenos e de montagem do MHC de classe I, influenciando as interações na sinapse imune. A desregulação da sinalização mediada por HLA-E tem sido investigada em contextos de evasão imune viral, edição imune tumoral, biologia de transplantes e modelos de doenças inflamatórias.

As Partículas de Ativação Lentivirais HLA-E (m) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de H2-T-ps numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais HLA-E (m) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição H2-T-ps, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de HLA-E. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo H2-T-ps e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.