HLA-E Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-437133-ACT

H2-T-ps codifica uma molécula murina de MHC classe Ib funcionalmente análoga ao HLA-E, especializada em apresentar um repertório restrito de peptídeos para regular a vigilância imune inata e adaptativa. Ao interagir com os receptores CD94/NKG2 em células NK e em subconjuntos de células T, moléculas do tipo HLA-E ajudam a ajustar os limiares de ativação citotóxica, conectando o processamento de antígenos no RE a uma sinalização semelhante a checkpoints imunológicos. Esse eixo se integra a vias induzidas por interferon que modulam a apresentação de antígenos e as respostas ao estresse celular, influenciando a homeostase tecidual durante a inflamação. A expressão desregulada ou o carregamento peptídico do MHC I não clássico pode alterar a educação de células NK e as interações entre tumor e sistema imune, tornando esse gene relevante para estudos de infecção, autoimunidade e imunobiologia do câncer em modelos murinos.

HLA-E O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de H2-T-ps sem alterar a sequência de ADN subjacente.

HLA-E O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus H2-T-ps em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição H2-T-ps, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de HLA-E. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus H2-T-ps nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de HLA-E no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via HLA-E em células tumorais com expressão de H2-T-ps silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.