HLA-DRβ1 Double Nickaseプラスミド (h): sc-406727-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- HLA-DRβ1 Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- HLA-DRβ1ダブルニカースプラスミド（h）およびHLA-DRβ1ダブルニカースプラスミド（h2）は、HLA-DRB1を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
HLA-DRβ1 Double Nickaseプラスミド (h) | sc-406727-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
HLA-DRβ1 Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-406727-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
HLA-DRB1は、HLA-DRのMHCクラスIIヘテロ二量体を構成するβ鎖をコードしており、細胞外由来のペプチド抗原をCD4+ T細胞に提示することで適応免疫を担う中核的な分子です。HLA-DRβ1の発現およびペプチドのロード（装填）は、インバリアント鎖（CD74）の輸送やHLA-DMによるペプチド交換を含むエンドソーム系の抗原プロセシング経路に依存しており、T細胞レパートリーや活性化の閾値の形成に関与します。HLA-DRB1の多様性や制御異常は、抗原特異性と免疫寛容における役割を反映して、免疫介在性疾患の感受性や移植に関連する同種反応性（アロ反応性）と強く関連します。高度に多型性の高い遺伝子座として、自己免疫の機序、宿主―病原体相互作用、ならびにヒト細胞における抗原提示ダイナミクスの研究対象として広く解析されています。
HLA-DRβ1 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における HLA-DRB1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、HLA-DRB1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、HLA-DRB1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、HLA-DRB1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。