HLA-DOβ CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-420773

概要

H2-Obは、抗原提示細胞においてDOαとヘテロ二量体を形成する、非古典的なMHCクラスII関連タンパク質であるHLA-DOβのマウスオルソログをコードしています。この複合体は後期エンドソーム／リソソーム区画に局在し、HLA-DM/H2-DMの活性を調節することでMHCクラスIIへのペプチド搭載を制御し、CD4+ T細胞に提示されるペプチドレパートリーの形成に関与します。エンドソームでの抗原処理およびMHC IIの輸送に対する影響を通じて、H2-Obは免疫寛容、獲得免疫の活性化、ならびに体液性免疫応答の質に寄与します。DO/DMバランスの破綻やMHC II抗原提示の変化は、マウスモデルにおける自己免疫、感染、炎症性疾患の機序研究において重要な観点です。

HLA-DOβ CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるH2-Ob遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、H2-Ob内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、H2-Obのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、HLA-DOβタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、HLA-DOβシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、H2-Ob欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• HLA-DOβの機能に不可欠なH2-Obエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、H2-Obゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• HLA-DOβ CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびHLA-DOβ CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、H2-Ob遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  HLA-DOβ HDRプラスミド（m）および HLA-DOβ HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはH2-Obホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のH2-Ob標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。