Plásmido Doble Nickase (h) HLA-C: sc-401517-NIC

HLA-C codifica una cadena pesada clásica del MHC de clase I que se asocia con la β2-microglobulina para presentar en la superficie celular péptidos de origen endógeno, lo que permite la vigilancia por parte de los linfocitos T CD8+. Además de la presentación de antígenos, HLA-C actúa como ligando dominante de receptores tipo inmunoglobulina de células asesinas (KIR), tanto inhibidores como activadores, modulando la educación de las células NK (natural killer) y los umbrales de citotoxicidad. A través de estos procesos de reconocimiento inmunitario, HLA-C se integra con las vías de procesamiento y presentación de antígenos impulsadas por interferón, incluida la generación de péptidos por el proteasoma y la carga dependiente de TAP en el retículo endoplásmico. La variación genética y la expresión alterada de HLA-C se asocian con la susceptibilidad a enfermedades inmunomediadas e inflamatorias e influyen en las interacciones huésped–patógeno, lo que lo convierte en un locus clave para estudios mecanísticos de la regulación inmunitaria.

HLA-C El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus HLA-C en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de HLA-C. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de HLA-C. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con HLA-C alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.