Histone H1X Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-411232-ACT

O H1FX codifica a histona H1X, uma variante de histona de ligação (linker) que se liga ao DNA nucleossômico e contribui para a compactação da cromatina em níveis superiores e para a organização do genoma. Ao modular o espaçamento entre nucleossomos e a acessibilidade da cromatina, a histona H1X influencia a regulação transcricional, o timing de replicação do DNA e as respostas a danos no DNA por meio de vias de remodelamento da cromatina. Alterações na expressão de H1FX ou no equilíbrio entre variantes de histona H1 têm sido associadas à desregulação epigenética, que pode afetar transições de estado celular, programas de proliferação e a estabilidade do genoma. Essas características tornam o H1FX um alvo útil para estudar a arquitetura da cromatina, redes transcricionais e mecanismos epigenéticos relevantes para doenças em células humanas.

Histone H1X O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de H1FX sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Histone H1X O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus H1FX em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição H1FX, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Histone H1X. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus H1FX nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Histone H1X no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Histone H1X em células tumorais com expressão de H1FX silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.