Plásmido CRISPR de Activación (h) Histone H1⁰: sc-403716-ACT

H1F0 codifica la histona H1⁰, una variante de histona enlazadora asociada a la diferenciación que se une al ADN nucleosomal para estabilizar la compactación de la cromatina de orden superior y modular la accesibilidad transcripcional global. Al influir en el espaciamiento de los nucleosomas y la condensación de la cromatina, H1⁰ contribuye a la regulación epigenética de las transiciones de estado celular, la temporización de la replicación y las respuestas al daño del ADN. Se ha informado de una expresión alterada de H1F0 en múltiples tipos tumorales y contextos del desarrollo, donde los cambios en la organización de la cromatina se vinculan con modificaciones en la proliferación, el compromiso de linaje y la adaptación al estrés celular. Estas características hacen de H1⁰ un objetivo útil para estudiar la arquitectura de la cromatina, los programas transcripcionales y la remodelación epigenética en células humanas.

Histone H10 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de H1F0 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Histone H10 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus H1F0 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional H1F0, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Histone H10. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo H1F0 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Histone H10 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Histone H10 en células tumorales con expresión de H1F0 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.