Histone Deacetylase 6 (HDAC6) CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400314-ACT

HDAC6はヒストン脱アセチル化酵素6（Histone Deacetylase 6）をコードしており、主として細胞質に局在する脱アセチル化酵素です。α-チューブリン、コルタクチン、HSP90などヒストン以外の基質のアセチル化を制御することで、微小管ダイナミクス、細胞運動性、シャペロン依存的なプロテオスタシスに影響を与えます。ユビキチン依存的なアグリソーム形成およびオートファジーによる除去の制御を通じて、HDAC6は細胞骨格の再構築と、誤折りたたみタンパク質に対するストレス応答を統合します。さらにHDAC6は、自然免疫や炎症性転写プログラムに関連する経路のシグナル伝達も調節し、NF-κBによって制御される下流出力にも影響します。HDAC6の活性または発現の異常は、がん細胞の表現型、神経変性に関連するプロテオトキシック・ストレス、免疫介在性疾患の機序と関連づけられており、機構研究に有用な標的（ノード）となっています。

Histone Deacetylase 6 (HDAC6) CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性HDAC6の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Histone Deacetylase 6 (HDAC6) CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における HDAC6 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はHDAC6転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Histone Deacetylase 6 (HDAC6)の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のHDAC6遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるHistone Deacetylase 6 (HDAC6)依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびHDAC6発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるHistone Deacetylase 6 (HDAC6)経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。